واكنش زنجيره اي پلي مراز (Polymerase chain reaction : (PCR
اصول و مباني PCR
اولين و شايد بتوان گفت مهمترين و بهترين سيستمي كه در آن مولكول هدف افزايش مي يابد، تكنيك PCR مي باشد. اين تكنيك اولين بار توسط Mullis در سال 1985ابداع گرديد. كري موليس در سال 1993 به دليل اختراع PCR موفق به دريافت جايزه نوبل گرديد . PCR از نظر اصول عملي، تشابه زيادي به همانند سازي DNA دارد و در واقع بر گرقته از آن است. در تكنيك PCR اصول همانند سازي DNA در داخل سلول تقليد و تكرار مي شوند. تكنيك PCR شامل سيكل هاي تكرار شده اي است كه در آن به كمك يك سري پرايمر و با كمك آنزيم از روي يك DNA الگو عمل همانند سازي را انجام مي دهد. اين پرايمر ها مكمل بخش هايي از DNA دو رشته اي هدف هستند. پرايمر ها زمانيكه در رشته هدف بوسيله حرارت، واسرشت شونده با كاهش دما در مرحله بعد به سكانس هاي مكمل خود در DNA هدف متصل مي شود.
براي شكستن پيوند هر هيدروژني بين جفت باز A:T دو درجه سانتي گراد و براي شكستن هر باند بين جفت باز G:C چهار درجه سانتي گراد حرارت لازم است. كه به آن اصطلاحاٌ دماي ذوب يا (Tm) مي گويند. اما براي اينكه C به G و A به Tجفت شود با توجه به مشخصات پرايمر مورد استفاده، حرارت مورد نياز را تعيين مي كنند. DNA هاي دو رشته اي با توجه به مشخصات پرايمر مورد استفاده، حرارت مورد نياز را تعيين مي كنند. DNA هاي دو رشته اي به وسيله حرارت از هم باز مي شوند. وچون غلظت پرايمر زياد است وصل شدن پرايمر به مكملش انرژي نمي خواهد و به راحتي به مكمل هاي خود متصل مي شود. يك پروتكل معمول PCR شامل 25 الي 40 سيكل حرارتي مي باشد. از نظر تئوري در هر سيكل، تعداد سكانس هاي هدف دو برابر مي شوند. بنابراين تكرار سيكل هاي حرارتي باعث افزايش سكانس هدف به صورت تصاعدي مي گردد. در سيكل اول ، اندازه دو رشته اول بوجود آمده، بزرگتر از توالي واقعي مورد نظر است زيرا در زمان داده شده به اين سيكل DNA پلي مراز از انتهاي توالي مورد نظر جلوتر رفته، محصول PCR بزرگتر از توالي مورد نظر را توليد مي كند. با اين وجود بعد از سيكل دوم، فراورده هاي حاصل داراي اندازه مورد نظر هستند كه به آنها محصول كوتاه PCR گفته مي شود. ( كه هم اندازه با طول توالي مورد نظر هستند. يعني از ابتداي پرايمر اول تا ابتداي پرايمر دوم).
فراورده هاي حاصل را مي توان از طريق بررسي اندازه، برش آنزيمي با انزيم هاي محدود كننده، تعيين ترادف و هيبريداسيون به طور دقيق تعيين هويت كرد.
آيا انسان با ميمون نياي مشترك دارد يا موجودي متفاوت است